色譜(pu)法(fa)，又稱層(ceng)析法(fa)。根據其分離原理，有吸附色譜(pu)、分配色譜(pu)、離子交(jiao)換色譜(pu)與排阻色譜(pu)等方法(fa)。

吸附色(se)譜(pu)是(shi)利用(yong)吸附劑(ji)(ji)對被分(fen)離物質的吸附能力(li)不同，用(yong)溶(rong)劑(ji)(ji)或氣體洗脫，以(yi)使(shi)組分(fen)分(fen)離。常用(yong)的吸附劑(ji)(ji)有氧化(hua)鋁、硅膠、聚酰胺等(deng)有吸附活性的物質。

分配色(se)譜是(shi)利用溶液(ye)中被分離(li)物質在兩相(xiang)中分配系(xi)數不同，以(yi)使(shi)組分分離(li)。其(qi)中一相(xiang)為(wei)液(ye)體，涂布(bu)或使(shi)之鍵(jian)合在固體載體上，稱(cheng)固定(ding)相(xiang)；另(ling)一相(xiang)為(wei)液(ye)體或氣體，稱(cheng)流動相(xiang)。常(chang)用的載體有(you)硅(gui)膠(jiao)、硅(gui)藻土、硅(gui)鎂型吸附劑與纖維素粉等。

離(li)子交(jiao)換色(se)譜是利用被分(fen)(fen)離(li)物質在(zai)離(li)子交(jiao)換樹(shu)(shu)脂(zhi)上的(de)離(li)子交(jiao)換勢不(bu)同而使組分(fen)(fen)分(fen)(fen)離(li)。常用的(de)有(you)不(bu)同強度的(de)陽、陰離(li)子交(jiao)換樹(shu)(shu)脂(zhi)，流動相一般為(wei)水或含有(you)有(you)機溶劑的(de)緩沖(chong)液。

排(pai)阻色(se)譜(pu)又稱(cheng)凝(ning)膠色(se)譜(pu)或凝(ning)膠滲透色(se)譜(pu)，是利用(yong)(yong)被分離物質(zhi)分子(zi)量大小(xiao)的(de)(de)不同(tong)和在填(tian)料上滲透程度的(de)(de)不同(tong)，以(yi)使組分分離。常用(yong)(yong)的(de)(de)填(tian)料有分子(zi)篩(shai)、葡(pu)聚糖凝(ning)膠、微孔聚合物、微孔硅膠或玻璃珠等，可根據載體和試樣的(de)(de)性(xing)質(zhi)，選用(yong)(yong)水或有機溶(rong)劑為流動相。

色(se)(se)譜(pu)(pu)法(fa)的(de)分離(li)方法(fa)，有柱色(se)(se)譜(pu)(pu)法(fa)、紙(zhi)色(se)(se)譜(pu)(pu)法(fa)、薄(bo)層色(se)(se)譜(pu)(pu)法(fa)、氣(qi)相(xiang)(xiang)色(se)(se)譜(pu)(pu)法(fa)、高效液相(xiang)(xiang)色(se)(se)譜(pu)(pu)法(fa)等。色(se)(se)譜(pu)(pu)所用(yong)溶(rong)劑(ji)應(ying)(ying)與試樣(yang)不(bu)起化學反應(ying)(ying)，并應(ying)(ying)用(yong)純度(du)較高的(de)溶(rong)劑(ji)。色(se)(se)譜(pu)(pu)時(shi)的(de)溫(wen)度(du)，除氣(qi)相(xiang)(xiang)色(se)(se)譜(pu)(pu)法(fa)或另有規定外，系指在室溫(wen)下操作。

分(fen)離(li)后各成(cheng)(cheng)分(fen)的(de)檢(jian)出(chu)(chu)(chu)，應(ying)采(cai)用(yong)(yong)(yong)(yong)各單體中規定(ding)的(de)方(fang)法(fa)(fa)。通(tong)常(chang)用(yong)(yong)(yong)(yong)柱(zhu)色(se)(se)(se)(se)(se)(se)譜(pu)、紙色(se)(se)(se)(se)(se)(se)譜(pu)或薄(bo)(bo)層(ceng)色(se)(se)(se)(se)(se)(se)譜(pu)分(fen)離(li)有色(se)(se)(se)(se)(se)(se)物質時，可(ke)(ke)(ke)根據其色(se)(se)(se)(se)(se)(se)帶進行區分(fen)，對(dui)有些無色(se)(se)(se)(se)(se)(se)物質，可(ke)(ke)(ke)在245-365nm的(de)紫外(wai)燈下(xia)檢(jian)視。紙色(se)(se)(se)(se)(se)(se)譜(pu)或薄(bo)(bo)層(ceng)色(se)(se)(se)(se)(se)(se)譜(pu)也(ye)可(ke)(ke)(ke)噴顯色(se)(se)(se)(se)(se)(se)劑使(shi)之顯色(se)(se)(se)(se)(se)(se)。薄(bo)(bo)層(ceng)色(se)(se)(se)(se)(se)(se)譜(pu)還可(ke)(ke)(ke)用(yong)(yong)(yong)(yong)加有熒光物質的(de)薄(bo)(bo)層(ceng)硅(gui)膠(jiao)，采(cai)用(yong)(yong)(yong)(yong)熒光熄滅法(fa)(fa)檢(jian)視。用(yong)(yong)(yong)(yong)紙色(se)(se)(se)(se)(se)(se)譜(pu)進行定(ding)量測(ce)(ce)(ce)定(ding)時，可(ke)(ke)(ke)將色(se)(se)(se)(se)(se)(se)譜(pu)斑(ban)點部分(fen)剪(jian)下(xia)或挖取，用(yong)(yong)(yong)(yong)溶(rong)劑溶(rong)出(chu)(chu)(chu)該成(cheng)(cheng)分(fen)，再用(yong)(yong)(yong)(yong)分(fen)光光度法(fa)(fa)或比色(se)(se)(se)(se)(se)(se)法(fa)(fa)測(ce)(ce)(ce)定(ding)，也(ye)可(ke)(ke)(ke)用(yong)(yong)(yong)(yong)色(se)(se)(se)(se)(se)(se)譜(pu)掃描(miao)儀(yi)直(zhi)接(jie)(jie)在紙或薄(bo)(bo)層(ceng)板(ban)上(shang)測(ce)(ce)(ce)出(chu)(chu)(chu)，也(ye)可(ke)(ke)(ke)用(yong)(yong)(yong)(yong)色(se)(se)(se)(se)(se)(se)譜(pu)掃描(miao)儀(yi)直(zhi)接(jie)(jie)以紙或薄(bo)(bo)層(ceng)板(ban)上(shang)測(ce)(ce)(ce)出(chu)(chu)(chu)。柱(zhu)色(se)(se)(se)(se)(se)(se)譜(pu)、氣相色(se)(se)(se)(se)(se)(se)譜(pu)和(he)高(gao)效液相色(se)(se)(se)(se)(se)(se)譜(pu)可(ke)(ke)(ke)用(yong)(yong)(yong)(yong)接(jie)(jie)于色(se)(se)(se)(se)(se)(se)譜(pu)柱(zhu)出(chu)(chu)(chu)口處的(de)各種檢(jian)測(ce)(ce)(ce)器檢(jian)測(ce)(ce)(ce)。柱(zhu)色(se)(se)(se)(se)(se)(se)譜(pu)還可(ke)(ke)(ke)分(fen)部收集流出(chu)(chu)(chu)液后用(yong)(yong)(yong)(yong)適宜方(fang)法(fa)(fa)測(ce)(ce)(ce)定(ding)。

柱色譜法

所用(yong)色譜(pu)管為內徑(jing)均(jun)勻、下(xia)端縮口的(de)(de)硬質玻璃管，下(xia)端用(yong)棉花或玻璃纖維塞(sai)住(zhu)，管內裝有(you)(you)吸附(fu)(fu)劑。色譜(pu)柱的(de)(de)大(da)小，吸附(fu)(fu)劑的(de)(de)品種和用(yong)量(liang)，以及洗脫時(shi)的(de)(de)流速(su)，均(jun)按各單體中的(de)(de)規定(ding)。吸附(fu)(fu)劑的(de)(de)顆(ke)粒(li)應(ying)盡可能保持大(da)小均(jun)勻，以保證良好(hao)的(de)(de)分離(li)效(xiao)(xiao)果(guo)，除另(ling)有(you)(you)規定(ding)外通(tong)常多采用(yong)直(zhi)徑(jing)為0.07-0.15mm的(de)(de)顆(ke)粒(li)。吸附(fu)(fu)劑的(de)(de)活(huo)性或吸附(fu)(fu)力(li)對分離(li)效(xiao)(xiao)果(guo)有(you)(you)影響，應(ying)予注意。

吸(xi)附劑(ji)(ji)的(de)(de)填(tian)裝 干法：將吸(xi)附劑(ji)(ji)一次加(jia)入(ru)色(se)譜(pu)管(guan)，振動管(guan)壁(bi)使其(qi)均(jun)勻(yun)下(xia)沉，然(ran)后(hou)(hou)(hou)沿管(guan)壁(bi)緩(huan)(huan)緩(huan)(huan)加(jia)入(ru)開(kai)始(shi)層析時使用的(de)(de)流(liu)(liu)(liu)動相(xiang)，或(huo)將色(se)譜(pu)管(guan)下(xia)端出口加(jia)活塞，加(jia)入(ru)適(shi)量的(de)(de)流(liu)(liu)(liu)動相(xiang)，旋開(kai)活使流(liu)(liu)(liu)動相(xiang)緩(huan)(huan)緩(huan)(huan)滴出，然(ran)后(hou)(hou)(hou)自管(guan)頂(ding)緩(huan)(huan)緩(huan)(huan)加(jia)入(ru)吸(xi)附劑(ji)(ji)，使其(qi)均(jun)勻(yun)地潤(run)濕下(xia)沉，在管(guan)內形成松緊適(shi)度(du)的(de)(de)吸(xi)附層。操(cao)作過(guo)程中應保持(chi)有充分的(de)(de)流(liu)(liu)(liu)動相(xiang)留在吸(xi)附層的(de)(de)上面(mian)(mian)。濕法：將吸(xi)附劑(ji)(ji)與流(liu)(liu)(liu)動相(xiang)混合，攪拌以除去空氣泡，徐(xu)徐(xu)傾入(ru)色(se)譜(pu)管(guan)中，然(ran)后(hou)(hou)(hou)再加(jia)入(ru)流(liu)(liu)(liu)動相(xiang)，將附著于管(guan)壁(bi)的(de)(de)吸(xi)附劑(ji)(ji)洗下(xia)，使色(se)譜(pu)柱(zhu)表面(mian)(mian)平整。 俟填(tian)裝吸(xi)附劑(ji)(ji)所用流(liu)(liu)(liu)動相(xiang)從色(se)譜(pu)柱(zhu)自然(ran)流(liu)(liu)(liu)下(xia)，液面(mian)(mian)將柱(zhu)表面(mian)(mian)相(xiang)平時，即加(jia)試樣(yang)溶(rong)液。

試樣(yang)的(de)加(jia)(jia)入 除另有規定外(wai)，將試樣(yang)溶(rong)于層析時使用的(de)流動(dong)相中(zhong)，再沿色(se)譜管壁緩緩加(jia)(jia)入。注意勿使吸(xi)附(fu)劑(ji)翻起。或將試樣(yang)溶(rong)于適當的(de)溶(rong)劑(ji)中(zhong)。與(yu)少量吸(xi)附(fu)劑(ji)混勻，再使溶(rong)劑(ji)揮(hui)發去盡(jin)后使呈松散狀(zhuang)；將混有試樣(yang)的(de)吸(xi)附(fu)劑(ji)加(jia)(jia)在(zai)已(yi)制備好(hao)的(de)色(se)譜柱(zhu)上面。如試樣(yang)在(zai)常(chang)用溶(rong)劑(ji)中(zhong)不溶(rong)解(jie)，可將試樣(yang)與(yu)適量的(de)吸(xi)附(fu)劑(ji)在(zai)乳缽(bo)中(zhong)研磨混勻后加(jia)(jia)入。

洗(xi)脫(tuo) 除(chu)另有規定外(wai)，通常按(an)流(liu)動(dong)(dong)(dong)相(xiang)洗(xi)脫(tuo)能力大小，遞增(zeng)變(bian)換流(liu)動(dong)(dong)(dong)相(xiang)的(de)(de)品(pin)種和(he)比例，分(fen)別分(fen)部收(shou)集流(liu)出液(ye)，至流(liu)出液(ye)中(zhong)所含(han)成(cheng)分(fen)顯著減少(shao)或(huo)不再(zai)含(han)有時，再(zai)改變(bian)流(liu)動(dong)(dong)(dong)相(xiang)的(de)(de)品(pin)種和(he)比例。操作過(guo)程中(zhong)應(ying)保持有充(chong)分(fen)的(de)(de)流(liu)動(dong)(dong)(dong)相(xiang)留在吸附層的(de)(de)上(shang)面。

紙色譜法

以紙為(wei)載體，用(yong)(yong)單(dan)一(yi)溶劑(ji)或(huo)混合溶劑(ji)進(jin)行分配(pei)。亦(yi)即以紙上所含(han)水(shui)分或(huo)其他物質為(wei)固定相，用(yong)(yong)流動(dong)相進(jin)行展開的分配(pei)色譜法。

所(suo)(suo)(suo)用(yong)(yong)(yong)(yong)濾(lv)(lv)(lv)紙應質地均(jun)勻平(ping)整，具有(you)一(yi)(yi)定(ding)(ding)(ding)機械強度，必(bi)須不(bu)含(han)會影(ying)響色(se)(se)譜(pu)(pu)(pu)效(xiao)果(guo)的(de)(de)(de)(de)(de)雜質，也不(bu)應與(yu)(yu)所(suo)(suo)(suo)用(yong)(yong)(yong)(yong)顯(xian)色(se)(se)劑起(qi)作(zuo)用(yong)(yong)(yong)(yong)，以(yi)(yi)免(mian)影(ying)響分(fen)(fen)離和(he)鑒別效(xiao)果(guo)，必(bi)要(yao)時可作(zuo)特殊處(chu)理(li)后(hou)(hou)再用(yong)(yong)(yong)(yong)。 試樣經(jing)層(ceng)析(xi)后(hou)(hou)可用(yong)(yong)(yong)(yong)比(bi)(bi)(bi)移(yi)值(zhi)（Rf）表(biao)示各組成成分(fen)(fen)的(de)(de)(de)(de)(de)位置（比(bi)(bi)(bi)移(yi)值(zhi)=原點中(zhong)(zhong)心至(zhi)色(se)(se)譜(pu)(pu)(pu)斑(ban)點中(zhong)(zhong)心的(de)(de)(de)(de)(de)距離與(yu)(yu)原點中(zhong)(zhong)心至(zhi)流動相(xiang)前沿的(de)(de)(de)(de)(de)距離之(zhi)比(bi)(bi)(bi)），由于影(ying)響比(bi)(bi)(bi)移(yi)值(zhi)的(de)(de)(de)(de)(de)因素較(jiao)多，因此一(yi)(yi)般采用(yong)(yong)(yong)(yong)在相(xiang)同實(shi)驗條件下(xia)對照物質對比(bi)(bi)(bi)以(yi)(yi)確定(ding)(ding)(ding)其異同。作(zuo)為(wei)單(dan)(dan)體鑒別時，試樣所(suo)(suo)(suo)顯(xian)主(zhu)色(se)(se)譜(pu)(pu)(pu)斑(ban)點的(de)(de)(de)(de)(de)顏色(se)(se)（或(huo)(huo)熒光）與(yu)(yu)供(gong)置，應與(yu)(yu)對照（標準）樣所(suo)(suo)(suo)顯(xian)主(zhu)色(se)(se)的(de)(de)(de)(de)(de)譜(pu)(pu)(pu)斑(ban)點或(huo)(huo)供(gong)試品-對照品（1∶1）混合所(suo)(suo)(suo)顯(xian)的(de)(de)(de)(de)(de)主(zhu)色(se)(se)譜(pu)(pu)(pu)斑(ban)點相(xiang)同。作(zuo)為(wei)質量(liang)指(zhi)標（純度）檢(jian)查時，可取一(yi)(yi)定(ding)(ding)(ding)量(liang)的(de)(de)(de)(de)(de)試樣，經(jing)展(zhan)開后(hou)(hou)，按(an)各單(dan)(dan)體的(de)(de)(de)(de)(de)規定(ding)(ding)(ding)，檢(jian)視其所(suo)(suo)(suo)顯(xian)雜質色(se)(se)譜(pu)(pu)(pu)斑(ban)點的(de)(de)(de)(de)(de)個數或(huo)(huo)呈色(se)(se)（或(huo)(huo)熒光）的(de)(de)(de)(de)(de)強度。作(zuo)為(wei)含(han)量(liang)測定(ding)(ding)(ding)時，可將色(se)(se)譜(pu)(pu)(pu)斑(ban)點剪下(xia)洗脫后(hou)(hou)，再用(yong)(yong)(yong)(yong)適(shi)宜的(de)(de)(de)(de)(de)方法測定(ding)(ding)(ding)，也可用(yong)(yong)(yong)(yong)色(se)(se)譜(pu)(pu)(pu)掃描(miao)儀測定(ding)(ding)(ding)。 1、下(xia)行法 所(suo)(suo)(suo)用(yong)(yong)(yong)(yong)色(se)(se)譜(pu)(pu)(pu)缸(gang)(gang)(gang)一(yi)(yi)般為(wei)圓(yuan)形或(huo)(huo)長(chang)方形玻(bo)璃(li)缸(gang)(gang)(gang)，缸(gang)(gang)(gang)上有(you)磨口玻(bo)璃(li)蓋，應能密(mi)閉，蓋上有(you)孔，可插(cha)入分(fen)(fen)液漏(lou)斗，以(yi)(yi)加入流動相(xiang)。在近缸(gang)(gang)(gang)頂端有(you)一(yi)(yi)用(yong)(yong)(yong)(yong)支架(jia)架(jia)起(qi)的(de)(de)(de)(de)(de)玻(bo)璃(li)槽作(zuo)為(wei)流動相(xiang)的(de)(de)(de)(de)(de)容(rong)器(qi)，槽內有(you)一(yi)(yi)玻(bo)璃(li)棒(bang)，用(yong)(yong)(yong)(yong)以(yi)(yi)支持(chi)色(se)(se)譜(pu)(pu)(pu)濾(lv)(lv)(lv)紙使其自然下(xia)垂(chui)，避免(mian)流動相(xiang)沿濾(lv)(lv)(lv)紙與(yu)(yu)溶劑槽之(zhi)間(jian)發生(sheng)虹吸現(xian)象。

取(qu)適(shi)當的(de)(de)色譜(pu)濾紙(zhi)按纖維長絲方向切成(cheng)(cheng)適(shi)當大小的(de)(de)紙(zhi)條(tiao)，離(li)紙(zhi)條(tiao)上(shang)端(duan)適(shi)當的(de)(de)距離(li)（使色譜(pu)紙(zhi)上(shang)端(duan)能(neng)(neng)足夠(gou)浸(jin)入溶(rong)劑(ji)(ji)槽(cao)內的(de)(de)流(liu)動相中(zhong)，并使點(dian)(dian)樣(yang)(yang)(yang)基線能(neng)(neng)在溶(rong)劑(ji)(ji)槽(cao)側(ce)的(de)(de)玻璃支持(chi)棒下(xia)數(shu)厘(li)米處）用(yong)鉛(qian)筆劃(hua)一點(dian)(dian)樣(yang)(yang)(yang)基線，必(bi)要時色譜(pu)紙(zhi)下(xia)端(duan)可切成(cheng)(cheng)鋸齒形(xing)，以便于(yu)流(liu)動相滴下(xia)。 將(jiang)試(shi)樣(yang)(yang)(yang)溶(rong)于(yu)適(shi)當的(de)(de)溶(rong)劑(ji)(ji)中(zhong)，制成(cheng)(cheng)一定濃度的(de)(de)溶(rong)劑(ji)(ji)。用(yong)微量吸管或微量注(zhu)射(she)器吸取(qu)溶(rong)劑(ji)(ji)，點(dian)(dian)于(yu)點(dian)(dian)樣(yang)(yang)(yang)基線上(shang)，溶(rong)液宜分(fen)次點(dian)(dian)加(jia)，每(mei)次點(dian)(dian)加(jia)后，俟其自然(ran)干(gan)燥、低溫(wen)烘干(gan)或經溫(wen)熱氣流(liu)吹(chui)干(gan)。樣(yang)(yang)(yang)點(dian)(dian)直(zhi)徑一般不(bu)超過(guo)0.5cm，樣(yang)(yang)(yang)點(dian)(dian)通常應(ying)為圓形(xing)。

將(jiang)點(dian)(dian)樣(yang)后的色(se)(se)譜(pu)濾紙上端放在(zai)溶劑(ji)(ji)槽內(nei)，并(bing)用玻璃棒(bang)壓(ya)住，使色(se)(se)譜(pu)紙通過槽側玻璃支持棒(bang)自然下垂，點(dian)(dian)樣(yang)基線在(zai)支持棒(bang)下數厘米處。色(se)(se)譜(pu)開(kai)始(shi)前，色(se)(se)譜(pu)缸(gang)(gang)內(nei)用各單(dan)體中所規(gui)定的溶劑(ji)(ji)的蒸(zheng)(zheng)氣飽(bao)和，一(yi)般可在(zai)色(se)(se)譜(pu)缸(gang)(gang)底部放一(yi)裝有流(liu)動(dong)相(xiang)的平皿，或將(jiang)浸有流(liu)動(dong)相(xiang)的濾紙條附著在(zai)色(se)(se)譜(pu)缸(gang)(gang)的內(nei)壁上，放置(zhi)(zhi)一(yi)定時(shi)間，俟(si)溶劑(ji)(ji)揮發使缸(gang)(gang)內(nei)充滿飽(bao)和蒸(zheng)(zheng)氣。然后添加(jia)流(liu)動(dong)相(xiang)，使浸沒溶劑(ji)(ji)槽內(nei)濾紙，流(liu)動(dong)相(xiang)即經(jing)毛細管作用沿濾紙移動(dong)進行展開(kai)至(zhi)規(gui)定距離后，取(qu)出濾紙，標明流(liu)動(dong)相(xiang)前沿位置(zhi)(zhi)，俟(si)流(liu)動(dong)相(xiang)揮散后按規(gui)定方法檢出色(se)(se)譜(pu)斑(ban)點(dian)(dian)。

2、上(shang)行(xing)(xing)法(fa)(fa)(fa) 色(se)(se)(se)譜(pu)缸(gang)基(ji)本(ben)和(he)下(xia)(xia)行(xing)(xing)法(fa)(fa)(fa)相(xiang)(xiang)(xiang)似，唯(wei)除去溶劑槽和(he)支架，并在色(se)(se)(se)譜(pu)缸(gang)蓋上(shang)的孔中(zhong)加塞(sai)，塞(sai)中(zhong)插(cha)入玻(bo)璃懸鉤，以便將點樣后的色(se)(se)(se)譜(pu)濾紙(zhi)(zhi)掛在鉤上(shang)。色(se)(se)(se)譜(pu)濾紙(zhi)(zhi)一般長約25cm，寬度則視需要(yao)而(er)定(ding)。必要(yao)時可將色(se)(se)(se)譜(pu)濾紙(zhi)(zhi)卷成筒形。點樣基(ji)線(xian)距底邊約2.5cm，點樣方法(fa)(fa)(fa)與下(xia)(xia)行(xing)(xing)法(fa)(fa)(fa)相(xiang)(xiang)(xiang)同。色(se)(se)(se)譜(pu)缸(gang)內加入適量流(liu)動相(xiang)(xiang)(xiang)，放置，俟流(liu)動相(xiang)(xiang)(xiang)蒸氣飽和(he)后，再下(xia)(xia)降懸鉤，使色(se)(se)(se)譜(pu)濾紙(zhi)(zhi)浸入流(liu)動相(xiang)(xiang)(xiang)約0.5cm，流(liu)動相(xiang)(xiang)(xiang)即經毛(mao)細管作用(yong)沿(yan)色(se)(se)(se)譜(pu)濾紙(zhi)(zhi)上(shang)升，除另有規定(ding)外，一般展開至15cm后，取出(chu)晾干(gan)，按規定(ding)方法(fa)(fa)(fa)檢視。

色(se)(se)譜(pu)(pu)(pu)可以向(xiang)一個(ge)方(fang)向(xiang)進(jin)行(xing)，即單向(xiang)色(se)(se)譜(pu)(pu)(pu)；也可進(jin)行(xing)雙向(xiang)色(se)(se)譜(pu)(pu)(pu)，即先向(xiang)一個(ge)方(fang)向(xiang)展(zhan)開(kai)，取出，俟流(liu)動(dong)(dong)相完(wan)全揮發(fa)后，將濾紙轉90°，再(zai)用原流(liu)動(dong)(dong)相或另一種流(liu)動(dong)(dong)相進(jin)行(xing)展(zhan)。亦可多次展(zhan)開(kai)，連續展(zhan)或徑(jing)向(xiang)色(se)(se)譜(pu)(pu)(pu)等。

薄層色譜法

按(an)各(ge)單(dan)體(ti)所規定的(de)載體(ti)，放入適(shi)當容(rong)器，加入適(shi)量水以配成(cheng)懸浮液，在厚(hou)度(du)均勻(yun)一致的(de)50×200mm或200×200mm平滑玻璃板上將此懸浮液均布(bu)成(cheng)0.25mm的(de)厚(hou)度(du)，風干(gan)后(hou)一般在110度(du)下(xia)干(gan)燥0.5-1h（或按(an)單(dan)體(ti)規定）。

以(yi)離薄層板一(yi)(yi)端約(yue)25mm的(de)(de)位(wei)置(zhi)作(zuo)為點(dian)(dian)(dian)(dian)樣(yang)基線，用微量吸(xi)管按規(gui)(gui)定量吸(xi)取(qu)試樣(yang)液和對(dui)照（標準(zhun)）液，點(dian)(dian)(dian)(dian)于基線上，點(dian)(dian)(dian)(dian)與點(dian)(dian)(dian)(dian)之間(jian)的(de)(de)距(ju)離在(zai)10mm以(yi)上，液點(dian)(dian)(dian)(dian)的(de)(de)直徑約(yue)3mm，風干后，基線一(yi)(yi)端向下，將薄層板放入展(zhan)開(kai)(kai)(kai)溶(rong)劑(ji)，溶(rong)劑(ji)層深(shen)10mm，并預(yu)經開(kai)(kai)(kai)展(zhan)溶(rong)劑(ji)的(de)(de)蒸汽飽和。在(zai)展(zhan)開(kai)(kai)(kai)溶(rong)劑(ji)從(cong)基線上升至規(gui)(gui)定距(ju)離（一(yi)(yi)般為15cm）后，取(qu)出(chu)薄層板，風干，然后按規(gui)(gui)定的(de)(de)方(fang)法，對(dui)斑(ban)點(dian)(dian)(dian)(dian)的(de)(de)位(wei)置(zhi)和顏色進行檢查。

氣相色譜法

氣(qi)(qi)相(xiang)色譜(pu)(pu)(pu)(pu)法(fa)是在(zai)以適當的(de)固定(ding)(ding)相(xiang)做成(cheng)(cheng)的(de)柱(zhu)管內(nei)，利用(yong)氣(qi)(qi)體(ti)(ti)（載氣(qi)(qi)）作為移動相(xiang)，使(shi)試(shi)樣（氣(qi)(qi)體(ti)(ti)、液(ye)體(ti)(ti)或固體(ti)(ti)）在(zai)氣(qi)(qi)體(ti)(ti)狀態下(xia)展開，在(zai)色譜(pu)(pu)(pu)(pu)柱(zhu)內(nei)分(fen)離(li)后(hou)(hou)，各種成(cheng)(cheng)分(fen)先后(hou)(hou)進(jin)入檢(jian)測(ce)器(qi)，用(yong)記錄儀記錄色譜(pu)(pu)(pu)(pu)譜(pu)(pu)(pu)(pu)圖。 在(zai)對裝置進(jin)行調試(shi)后(hou)(hou)，按各單體(ti)(ti)的(de)規定(ding)(ding)條(tiao)件調整柱(zhu)管、檢(jian)測(ce)器(qi)、溫(wen)度和(he)載氣(qi)(qi)流量(liang)。進(jin)樣口溫(wen)度一(yi)般應高(gao)于柱(zhu)溫(wen)30-50度。如用(yong)火焰電(dian)離(li)檢(jian)測(ce)器(qi)，其溫(wen)度應等(deng)于或高(gao)于柱(zhu)溫(wen)，但不(bu)得低(di)于100度，以免(mian)水汽凝結。色譜(pu)(pu)(pu)(pu)上(shang)分(fen)析成(cheng)(cheng)分(fen)的(de)峰(feng)的(de)位(wei)置，以滯(zhi)留(liu)時(shi)間（從注入試(shi)樣液(ye)到出現成(cheng)(cheng)分(fen)最高(gao)峰(feng)的(de)時(shi)間）和(he)滯(zhi)留(liu)容量(liang)（滯(zhi)留(liu)時(shi)間×載氣(qi)(qi)流量(liang)）來表示。這(zhe)些在(zai)一(yi)定(ding)(ding)條(tiao)件下(xia)，就能(neng)反應出物質所具(ju)有特殊值，并據此確(que)定(ding)(ding)試(shi)樣成(cheng)(cheng)分(fen)。

根據色譜上出(chu)現(xian)的(de)(de)物質成(cheng)分的(de)(de)峰(feng)(feng)面(mian)積或峰(feng)(feng)高(gao)進行定(ding)量。峰(feng)(feng)面(mian)積可用面(mian)積測(ce)(ce)(ce)定(ding)儀(yi)測(ce)(ce)(ce)定(ding)，按半寬度(du)法求(qiu)得(de)（即(ji)以峰(feng)(feng)1/2處的(de)(de)峰(feng)(feng)寬×峰(feng)(feng)高(gao)求(qiu)得(de)）。峰(feng)(feng)高(gao)的(de)(de)測(ce)(ce)(ce)定(ding)方法是從峰(feng)(feng)高(gao)的(de)(de)頂(ding)點向記錄紙橫(heng)座標準垂線，找(zhao)出(chu)此垂線與峰(feng)(feng)的(de)(de)兩下端(duan)聯(lian)結(jie)線的(de)(de)交(jiao)點，即(ji)以此交(jiao)點至(zhi)峰(feng)(feng)頂(ding)點的(de)(de)距離(li)長度(du)為峰(feng)(feng)高(gao)。

定量方法(fa)可分(fen)以下(xia)三種：

1、內標(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)法 取(qu)標(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)被(bei)測成分(fen)，按依次增(zeng)加或減(jian)少的(de)(de)已知階段量(liang)(liang)，各(ge)自分(fen)別加入各(ge)單體所規(gui)定的(de)(de)定量(liang)(liang)內標(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)物(wu)質中，調(diao)制標(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)溶(rong)液。分(fen)別取(qu)此(ci)標(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)液的(de)(de)一(yi)定量(liang)(liang)注入色譜柱，根據(ju)色譜圖(tu)取(qu)標(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)被(bei)測成分(fen)的(de)(de)峰(feng)面積(ji)和(he)峰(feng)高和(he)內標(biao)物(wu)質的(de)(de)峰(feng)面積(ji)和(he)峰(feng)高的(de)(de)比例為(wei)縱座標(biao)，取(qu)標(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)被(bei)測成分(fen)量(liang)(liang)和(he)內標(biao)物(wu)質量(liang)(liang)之比，或標(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)被(bei)測成分(fen)量(liang)(liang)為(wei)橫坐標(biao)，制成標(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)曲線。

然(ran)后(hou)(hou)按(an)單體中(zhong)所規定的(de)(de)(de)方法調(diao)制(zhi)試樣(yang)(yang)液。在調(diao)制(zhi)試樣(yang)(yang)液時(shi)，預先加(jia)入與(yu)調(diao)制(zhi)標(biao)(biao)準液時(shi)等量的(de)(de)(de)內標(biao)(biao)物(wu)質(zhi)。然(ran)后(hou)(hou)按(an)制(zhi)作標(biao)(biao)準曲(qu)線時(shi)的(de)(de)(de)同(tong)樣(yang)(yang)條件下得出(chu)(chu)的(de)(de)(de)色譜，求出(chu)(chu)被測成(cheng)分的(de)(de)(de)峰(feng)面積(ji)(ji)或(huo)峰(feng)高和內標(biao)(biao)物(wu)質(zhi)的(de)(de)(de)峰(feng)積(ji)(ji)或(huo)峰(feng)高之(zhi)比，再按(an)標(biao)(biao)準曲(qu)線求出(chu)(chu)被測成(cheng)分的(de)(de)(de)含量。

所(suo)用的內標物質，應采(cai)用其(qi)峰(feng)面積的位(wei)置(zhi)與(yu)被測(ce)成分的峰(feng)的位(wei)置(zhi)盡可能接近(jin)并與(yu)被測(ce)成分以外的峰(feng)位(wei)置(zhi)完全分離的穩定的物質。

2、絕對標(biao)(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)(xian)法 取(qu)標(biao)(biao)準(zhun)被(bei)(bei)(bei)測(ce)(ce)(ce)成(cheng)(cheng)分 按(an)(an)依次增加或(huo)減少(shao)階段法，各自調(diao)制(zhi)成(cheng)(cheng)標(biao)(biao)準(zhun)液(ye)，注入一定量后(hou)，按(an)(an)色(se)譜(pu)圖取(qu)標(biao)(biao)準(zhun)被(bei)(bei)(bei)測(ce)(ce)(ce)成(cheng)(cheng)分的(de)(de)峰面(mian)積(ji)或(huo)峰高為(wei)縱(zong)座(zuo)標(biao)(biao)，而(er)以標(biao)(biao)準(zhun)被(bei)(bei)(bei)測(ce)(ce)(ce)成(cheng)(cheng)分的(de)(de)含(han)量為(wei)橫坐(zuo)標(biao)(biao)，制(zhi)成(cheng)(cheng)標(biao)(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)(xian)。然(ran)后(hou)按(an)(an)單體中所規定的(de)(de)方法制(zhi)備試樣(yang)液(ye)。取(qu)試樣(yang)液(ye)按(an)(an)制(zhi)標(biao)(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)(xian)時相同的(de)(de)條(tiao)件作出(chu)色(se)譜(pu)，求出(chu)被(bei)(bei)(bei)測(ce)(ce)(ce)成(cheng)(cheng)分的(de)(de)峰面(mian)積(ji)和峰高，再按(an)(an)標(biao)(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)(xian)求出(chu)被(bei)(bei)(bei)測(ce)(ce)(ce)成(cheng)(cheng)分的(de)(de)含(han)量。 3、峰面(mian)積(ji)百分率法 以色(se)譜(pu)中所得各種成(cheng)(cheng)分的(de)(de)峰面(mian)積(ji)的(de)(de)總(zong)和為(wei)100，按(an)(an)各成(cheng)(cheng)分的(de)(de)峰面(mian)積(ji)總(zong)和之比(bi)，求出(chu)各成(cheng)(cheng)分的(de)(de)組成(cheng)(cheng)比(bi)率。

氣液色譜法

這時所指的氣液色譜法(fa)，主要(yao)用于(yu)各種香(xiang)料物質的分(fen)析，基本(ben)條件和參數主要(yao)依照美國精油協會（EOA）于(yu)1979年所建議的方法(fa)。其(qi)基本(ben)原理、操作、標(biao)準狀(zhuang)態(tai)等(deng)均與(yu)上述氣相(xiang)色譜法(fa)相(xiang)同。

1、柱 用304號合金所制不銹鋼管，長3m，內徑2.16-2.57mm，外徑3.18mm。底物：極性柱為聚乙二醇20M（Carbowax 20M）,分子量約2萬；非極性柱為氣相色譜級甲基硅氧烷（SE-30），或二甲基硅氧烷（OV-1或OV-101）。底物濃度：重量的105。固體載體：10目或20目熔融煅燒過的硅藻土，經硅烷化和酸洗后，其自由傾落密度為0.2g/cm3，最小120目，最大80目。裝填密度每cm3應大于0.24g。
2、載氣 氦。最低流(liu)量為每分(fen)鐘25-50ml。

分析狀態

極性柱：起始溫度，最低75度；最終溫度，最高225度。升溫速度，每分鐘2-8度。
非極性柱：起始溫度，最低75度；最終溫度，不超過275度；升溫速度，每分鐘2-8度。
進樣溫度：225-250度。試樣量：0.1-1ul。
檢(jian)測器(qi)：用熱導池。檢(jian)測器(qi)的操作條件應維持恒定。

  使用微信“掃一掃”功能添加“谷騰環保網”

相關文章