附(fu)色(se)譜(pu)(pu)、分(fen)配色(se)譜(pu)(pu)、離子交換(huan)色(se)譜(pu)(pu)與排阻色(se)譜(pu)(pu)等方(fang)法(fa)。

吸附(fu)(fu)色譜是利用(yong)吸附(fu)(fu)劑(ji)對被分離(li)物質(zhi)的吸附(fu)(fu)能力(li)不同，用(yong)溶(rong)劑(ji)或氣體洗(xi)脫，以使組(zu)分分離(li)。常(chang)用(yong)的吸附(fu)(fu)劑(ji)有氧化(hua)鋁、硅(gui)膠、聚酰(xian)胺等(deng)有吸附(fu)(fu)活性的物質(zhi)。

分(fen)(fen)配色譜是利用溶液中被分(fen)(fen)離物質在兩相中分(fen)(fen)配系(xi)數不同，以(yi)使組分(fen)(fen)分(fen)(fen)離。其中一相為液體(ti)(ti)，涂布或使之鍵合在固體(ti)(ti)載體(ti)(ti)上，稱固定相；另一相為液體(ti)(ti)或氣體(ti)(ti)，稱流動(dong)相。常用的載體(ti)(ti)有硅膠、硅藻土、硅鎂型吸附劑與(yu)纖維素粉等。

離(li)(li)子交換色譜是利用被分(fen)(fen)離(li)(li)物質在離(li)(li)子交換樹脂上的(de)離(li)(li)子交換勢不(bu)同(tong)而使組分(fen)(fen)分(fen)(fen)離(li)(li)。常用的(de)有不(bu)同(tong)強度(du)的(de)陽(yang)、陰離(li)(li)子交換樹脂，流(liu)動相一般為水或含(han)有有機(ji)溶劑(ji)的(de)緩沖液。

排(pai)阻色譜(pu)又稱凝膠色譜(pu)或(huo)(huo)凝膠滲透(tou)色譜(pu)，是利用被分離物質(zhi)分子量大小的不(bu)同和(he)在填料上滲透(tou)程度的不(bu)同，以使組分分離。常用的填料有分子篩、葡聚糖凝膠、微(wei)孔聚合物、微(wei)孔硅膠或(huo)(huo)玻璃珠等，可根據載體和(he)試樣的性(xing)質(zhi)，選用水或(huo)(huo)有機溶劑為流(liu)動相。

色(se)(se)譜(pu)(pu)(pu)法(fa)(fa)(fa)(fa)的分離方法(fa)(fa)(fa)(fa)，有柱色(se)(se)譜(pu)(pu)(pu)法(fa)(fa)(fa)(fa)、紙色(se)(se)譜(pu)(pu)(pu)法(fa)(fa)(fa)(fa)、薄層色(se)(se)譜(pu)(pu)(pu)法(fa)(fa)(fa)(fa)、氣(qi)相(xiang)(xiang)色(se)(se)譜(pu)(pu)(pu)法(fa)(fa)(fa)(fa)、高(gao)效液相(xiang)(xiang)色(se)(se)譜(pu)(pu)(pu)法(fa)(fa)(fa)(fa)等。色(se)(se)譜(pu)(pu)(pu)所用(yong)(yong)溶(rong)劑應(ying)與(yu)試(shi)樣不起化學反應(ying)，并應(ying)用(yong)(yong)純度(du)較高(gao)的溶(rong)劑。色(se)(se)譜(pu)(pu)(pu)時的溫(wen)度(du)，除氣(qi)相(xiang)(xiang)色(se)(se)譜(pu)(pu)(pu)法(fa)(fa)(fa)(fa)或(huo)另有規定外(wai)，系指在(zai)室溫(wen)下操(cao)作(zuo)。

分(fen)(fen)離后各成(cheng)分(fen)(fen)的(de)檢(jian)出(chu)，應采(cai)用(yong)(yong)(yong)各單體中規(gui)定(ding)(ding)的(de)方法。通(tong)常用(yong)(yong)(yong)柱(zhu)(zhu)色(se)(se)(se)(se)(se)譜(pu)(pu)、紙(zhi)(zhi)色(se)(se)(se)(se)(se)譜(pu)(pu)或(huo)(huo)薄(bo)層(ceng)色(se)(se)(se)(se)(se)譜(pu)(pu)分(fen)(fen)離有色(se)(se)(se)(se)(se)物(wu)質時，可(ke)(ke)(ke)(ke)根據其(qi)色(se)(se)(se)(se)(se)帶進(jin)行區(qu)分(fen)(fen)，對有些無色(se)(se)(se)(se)(se)物(wu)質，可(ke)(ke)(ke)(ke)在245-365nm的(de)紫外(wai)燈(deng)下(xia)檢(jian)視。紙(zhi)(zhi)色(se)(se)(se)(se)(se)譜(pu)(pu)或(huo)(huo)薄(bo)層(ceng)色(se)(se)(se)(se)(se)譜(pu)(pu)也(ye)可(ke)(ke)(ke)(ke)噴顯色(se)(se)(se)(se)(se)劑使之顯色(se)(se)(se)(se)(se)。薄(bo)層(ceng)色(se)(se)(se)(se)(se)譜(pu)(pu)還(huan)(huan)可(ke)(ke)(ke)(ke)用(yong)(yong)(yong)加有熒(ying)光物(wu)質的(de)薄(bo)層(ceng)硅膠，采(cai)用(yong)(yong)(yong)熒(ying)光熄滅法檢(jian)視。用(yong)(yong)(yong)紙(zhi)(zhi)色(se)(se)(se)(se)(se)譜(pu)(pu)進(jin)行定(ding)(ding)量測(ce)定(ding)(ding)時，可(ke)(ke)(ke)(ke)將(jiang)色(se)(se)(se)(se)(se)譜(pu)(pu)斑點部分(fen)(fen)剪(jian)下(xia)或(huo)(huo)挖取，用(yong)(yong)(yong)溶劑溶出(chu)該成(cheng)分(fen)(fen)，再用(yong)(yong)(yong)分(fen)(fen)光光度法或(huo)(huo)比(bi)色(se)(se)(se)(se)(se)法測(ce)定(ding)(ding)，也(ye)可(ke)(ke)(ke)(ke)用(yong)(yong)(yong)色(se)(se)(se)(se)(se)譜(pu)(pu)掃(sao)描儀(yi)直接(jie)在紙(zhi)(zhi)或(huo)(huo)薄(bo)層(ceng)板上(shang)(shang)測(ce)出(chu)，也(ye)可(ke)(ke)(ke)(ke)用(yong)(yong)(yong)色(se)(se)(se)(se)(se)譜(pu)(pu)掃(sao)描儀(yi)直接(jie)以紙(zhi)(zhi)或(huo)(huo)薄(bo)層(ceng)板上(shang)(shang)測(ce)出(chu)。柱(zhu)(zhu)色(se)(se)(se)(se)(se)譜(pu)(pu)、氣相色(se)(se)(se)(se)(se)譜(pu)(pu)和高(gao)效液相色(se)(se)(se)(se)(se)譜(pu)(pu)可(ke)(ke)(ke)(ke)用(yong)(yong)(yong)接(jie)于(yu)色(se)(se)(se)(se)(se)譜(pu)(pu)柱(zhu)(zhu)出(chu)口處的(de)各種(zhong)檢(jian)測(ce)器檢(jian)測(ce)。柱(zhu)(zhu)色(se)(se)(se)(se)(se)譜(pu)(pu)還(huan)(huan)可(ke)(ke)(ke)(ke)分(fen)(fen)部收集(ji)流出(chu)液后用(yong)(yong)(yong)適宜方法測(ce)定(ding)(ding)。 柱(zhu)(zhu)色(se)(se)(se)(se)(se)譜(pu)(pu)法

所用色譜管(guan)為內徑(jing)均勻、下端縮口(kou)的(de)硬質玻(bo)璃(li)管(guan)，下端用棉花或玻(bo)璃(li)纖維塞(sai)住，管(guan)內裝有吸(xi)附劑(ji)(ji)。色譜柱的(de)大(da)小(xiao)，吸(xi)附劑(ji)(ji)的(de)品種和用量，以(yi)及洗脫時(shi)的(de)流速(su)，均按各單(dan)體中的(de)規定(ding)。吸(xi)附劑(ji)(ji)的(de)顆(ke)粒應盡可能保持大(da)小(xiao)均勻，以(yi)保證良好(hao)的(de)分(fen)離(li)效果(guo)，除另有規定(ding)外通常多采用直(zhi)徑(jing)為0.07-0.15mm的(de)顆(ke)粒。吸(xi)附劑(ji)(ji)的(de)活(huo)性(xing)或吸(xi)附力對分(fen)離(li)效果(guo)有影響，應予注意(yi)。

吸(xi)附劑(ji)(ji)的(de)(de)填裝(zhuang) 干法(fa)：將(jiang)吸(xi)附劑(ji)(ji)一次加入(ru)色(se)譜(pu)(pu)管(guan)，振(zhen)動(dong)(dong)(dong)(dong)管(guan)壁使其均勻下沉，然(ran)(ran)后沿管(guan)壁緩(huan)緩(huan)加入(ru)開(kai)始(shi)層(ceng)析(xi)時使用的(de)(de)流(liu)動(dong)(dong)(dong)(dong)相(xiang)(xiang)，或將(jiang)色(se)譜(pu)(pu)管(guan)下端出口(kou)加活(huo)塞，加入(ru)適量的(de)(de)流(liu)動(dong)(dong)(dong)(dong)相(xiang)(xiang)，旋開(kai)活(huo)使流(liu)動(dong)(dong)(dong)(dong)相(xiang)(xiang)緩(huan)緩(huan)滴出，然(ran)(ran)后自管(guan)頂(ding)緩(huan)緩(huan)加入(ru)吸(xi)附劑(ji)(ji)，使其均勻地潤濕(shi)下沉，在(zai)管(guan)內形成松緊適度的(de)(de)吸(xi)附層(ceng)。操作過程中應(ying)保持有充分的(de)(de)流(liu)動(dong)(dong)(dong)(dong)相(xiang)(xiang)留在(zai)吸(xi)附層(ceng)的(de)(de)上面。濕(shi)法(fa)：將(jiang)吸(xi)附劑(ji)(ji)與流(liu)動(dong)(dong)(dong)(dong)相(xiang)(xiang)混合，攪(jiao)拌以除去空(kong)氣泡，徐徐傾入(ru)色(se)譜(pu)(pu)管(guan)中，然(ran)(ran)后再加入(ru)流(liu)動(dong)(dong)(dong)(dong)相(xiang)(xiang)，將(jiang)附著于管(guan)壁的(de)(de)吸(xi)附劑(ji)(ji)洗下，使色(se)譜(pu)(pu)柱(zhu)表面平(ping)整(zheng)。 俟填裝(zhuang)吸(xi)附劑(ji)(ji)所用流(liu)動(dong)(dong)(dong)(dong)相(xiang)(xiang)從色(se)譜(pu)(pu)柱(zhu)自然(ran)(ran)流(liu)下，液面將(jiang)柱(zhu)表面相(xiang)(xiang)平(ping)時，即加試樣溶液。

試(shi)樣的(de)加入 除另有(you)規定外，將(jiang)試(shi)樣溶(rong)于(yu)層析(xi)時使(shi)用的(de)流(liu)動相中(zhong)，再(zai)沿色(se)譜管壁緩緩加入。注意勿使(shi)吸(xi)附(fu)(fu)劑翻起。或將(jiang)試(shi)樣溶(rong)于(yu)適(shi)當的(de)溶(rong)劑中(zhong)。與(yu)少量(liang)吸(xi)附(fu)(fu)劑混(hun)勻(yun)，再(zai)使(shi)溶(rong)劑揮發去盡后(hou)使(shi)呈松(song)散狀；將(jiang)混(hun)有(you)試(shi)樣的(de)吸(xi)附(fu)(fu)劑加在已制備好(hao)的(de)色(se)譜柱上(shang)面。如試(shi)樣在常(chang)用溶(rong)劑中(zhong)不溶(rong)解，可將(jiang)試(shi)樣與(yu)適(shi)量(liang)的(de)吸(xi)附(fu)(fu)劑在乳缽中(zhong)研磨(mo)混(hun)勻(yun)后(hou)加入。

洗(xi)脫 除另有(you)規定(ding)外，通常按流動相(xiang)洗(xi)脫能力(li)大(da)小，遞增變換流動相(xiang)的(de)品(pin)種和比例(li)，分(fen)(fen)別分(fen)(fen)部收集流出液，至流出液中所含成(cheng)分(fen)(fen)顯著減少(shao)或不再(zai)含有(you)時，再(zai)改變流動相(xiang)的(de)品(pin)種和比例(li)。操作過程中應(ying)保持有(you)充分(fen)(fen)的(de)流動相(xiang)留在吸附(fu)層的(de)上面。

紙色譜法

以紙為(wei)載(zai)體，用(yong)單一(yi)溶劑(ji)或混(hun)合溶劑(ji)進行分配。亦即以紙上所含(han)水(shui)分或其他物質為(wei)固定相，用(yong)流動相進行展開的分配色譜法。

所(suo)(suo)用(yong)(yong)(yong)濾(lv)(lv)紙(zhi)(zhi)應(ying)質(zhi)(zhi)地均勻(yun)平整，具(ju)有一(yi)定(ding)機械強(qiang)度，必須不(bu)含(han)會影響(xiang)色(se)(se)(se)譜(pu)效果的(de)(de)雜質(zhi)(zhi)，也不(bu)應(ying)與所(suo)(suo)用(yong)(yong)(yong)顯(xian)色(se)(se)(se)劑起作(zuo)用(yong)(yong)(yong)，以(yi)免影響(xiang)分(fen)離和鑒別效果，必要(yao)時可(ke)(ke)(ke)作(zuo)特殊處理后再用(yong)(yong)(yong)。 試樣經(jing)(jing)層析后可(ke)(ke)(ke)用(yong)(yong)(yong)比(bi)移值（Rf）表示各組成成分(fen)的(de)(de)位置（比(bi)移值=原(yuan)點中(zhong)(zhong)心(xin)至色(se)(se)(se)譜(pu)斑點中(zhong)(zhong)心(xin)的(de)(de)距離與原(yuan)點中(zhong)(zhong)心(xin)至流(liu)動(dong)相前沿的(de)(de)距離之(zhi)比(bi)），由于影響(xiang)比(bi)移值的(de)(de)因素較(jiao)多，因此一(yi)般采(cai)用(yong)(yong)(yong)在相同(tong)(tong)實驗(yan)條件下(xia)對(dui)照物質(zhi)(zhi)對(dui)比(bi)以(yi)確定(ding)其(qi)異同(tong)(tong)。作(zuo)為(wei)(wei)單(dan)體(ti)鑒別時，試樣所(suo)(suo)顯(xian)主色(se)(se)(se)譜(pu)斑點的(de)(de)顏色(se)(se)(se)（或(huo)熒光）與供置，應(ying)與對(dui)照（標準）樣所(suo)(suo)顯(xian)主色(se)(se)(se)的(de)(de)譜(pu)斑點或(huo)供試品-對(dui)照品（1∶1）混合所(suo)(suo)顯(xian)的(de)(de)主色(se)(se)(se)譜(pu)斑點相同(tong)(tong)。作(zuo)為(wei)(wei)質(zhi)(zhi)量(liang)指標（純度）檢查時，可(ke)(ke)(ke)取一(yi)定(ding)量(liang)的(de)(de)試樣，經(jing)(jing)展開后，按各單(dan)體(ti)的(de)(de)規(gui)定(ding)，檢視其(qi)所(suo)(suo)顯(xian)雜質(zhi)(zhi)色(se)(se)(se)譜(pu)斑點的(de)(de)個數或(huo)呈色(se)(se)(se)（或(huo)熒光）的(de)(de)強(qiang)度。作(zuo)為(wei)(wei)含(han)量(liang)測(ce)定(ding)時，可(ke)(ke)(ke)將色(se)(se)(se)譜(pu)斑點剪(jian)下(xia)洗脫后，再用(yong)(yong)(yong)適宜的(de)(de)方法(fa)測(ce)定(ding)，也可(ke)(ke)(ke)用(yong)(yong)(yong)色(se)(se)(se)譜(pu)掃(sao)描儀(yi)測(ce)定(ding)。 1、下(xia)行法(fa) 所(suo)(suo)用(yong)(yong)(yong)色(se)(se)(se)譜(pu)缸一(yi)般為(wei)(wei)圓形(xing)或(huo)長方形(xing)玻(bo)璃缸，缸上有磨口玻(bo)璃蓋(gai)，應(ying)能(neng)密閉，蓋(gai)上有孔，可(ke)(ke)(ke)插入(ru)分(fen)液(ye)漏斗，以(yi)加入(ru)流(liu)動(dong)相。在近缸頂端有一(yi)用(yong)(yong)(yong)支架(jia)架(jia)起的(de)(de)玻(bo)璃槽(cao)作(zuo)為(wei)(wei)流(liu)動(dong)相的(de)(de)容器，槽(cao)內(nei)有一(yi)玻(bo)璃棒，用(yong)(yong)(yong)以(yi)支持(chi)色(se)(se)(se)譜(pu)濾(lv)(lv)紙(zhi)(zhi)使(shi)其(qi)自(zi)然下(xia)垂，避免流(liu)動(dong)相沿濾(lv)(lv)紙(zhi)(zhi)與溶劑槽(cao)之(zhi)間發生虹吸現象。

取(qu)適當的(de)色(se)譜(pu)(pu)濾紙(zhi)按纖維長(chang)絲方向切成適當大(da)小的(de)紙(zhi)條，離紙(zhi)條上端適當的(de)距(ju)離（使色(se)譜(pu)(pu)紙(zhi)上端能(neng)足夠浸入溶(rong)(rong)劑槽內的(de)流(liu)(liu)(liu)動相中，并(bing)使點(dian)(dian)(dian)樣基線(xian)能(neng)在溶(rong)(rong)劑槽側的(de)玻璃支持棒(bang)下(xia)數(shu)厘米處）用(yong)鉛筆劃一點(dian)(dian)(dian)樣基線(xian)，必(bi)要(yao)時(shi)色(se)譜(pu)(pu)紙(zhi)下(xia)端可(ke)切成鋸(ju)齒形(xing)，以便于(yu)(yu)流(liu)(liu)(liu)動相滴下(xia)。 將試樣溶(rong)(rong)于(yu)(yu)適當的(de)溶(rong)(rong)劑中，制成一定濃度的(de)溶(rong)(rong)劑。用(yong)微(wei)量吸管或(huo)微(wei)量注射器吸取(qu)溶(rong)(rong)劑，點(dian)(dian)(dian)于(yu)(yu)點(dian)(dian)(dian)樣基線(xian)上，溶(rong)(rong)液宜分次(ci)點(dian)(dian)(dian)加，每次(ci)點(dian)(dian)(dian)加后(hou)，俟其自然干燥、低溫(wen)烘(hong)干或(huo)經溫(wen)熱氣(qi)流(liu)(liu)(liu)吹干。樣點(dian)(dian)(dian)直徑一般不超過0.5cm，樣點(dian)(dian)(dian)通常應為圓形(xing)。

將點樣(yang)后(hou)(hou)的(de)(de)色(se)(se)譜(pu)濾(lv)紙(zhi)(zhi)上端放在溶(rong)(rong)劑(ji)(ji)槽內(nei)(nei)，并用玻璃(li)棒(bang)壓住，使色(se)(se)譜(pu)紙(zhi)(zhi)通過槽側(ce)玻璃(li)支(zhi)(zhi)持棒(bang)自然下(xia)垂，點樣(yang)基(ji)線在支(zhi)(zhi)持棒(bang)下(xia)數厘(li)米處。色(se)(se)譜(pu)開始前，色(se)(se)譜(pu)缸內(nei)(nei)用各單體中所(suo)規(gui)定(ding)的(de)(de)溶(rong)(rong)劑(ji)(ji)的(de)(de)蒸(zheng)氣飽(bao)和(he)，一(yi)般可(ke)在色(se)(se)譜(pu)缸底部放一(yi)裝有流(liu)動相(xiang)的(de)(de)平皿，或將浸(jin)有流(liu)動相(xiang)的(de)(de)濾(lv)紙(zhi)(zhi)條附著在色(se)(se)譜(pu)缸的(de)(de)內(nei)(nei)壁(bi)上，放置(zhi)一(yi)定(ding)時間，俟溶(rong)(rong)劑(ji)(ji)揮發使缸內(nei)(nei)充(chong)滿飽(bao)和(he)蒸(zheng)氣。然后(hou)(hou)添加流(liu)動相(xiang)，使浸(jin)沒溶(rong)(rong)劑(ji)(ji)槽內(nei)(nei)濾(lv)紙(zhi)(zhi)，流(liu)動相(xiang)即經毛細管作用沿濾(lv)紙(zhi)(zhi)移動進行展開至規(gui)定(ding)距離(li)后(hou)(hou)，取(qu)出濾(lv)紙(zhi)(zhi)，標明流(liu)動相(xiang)前沿位置(zhi)，俟流(liu)動相(xiang)揮散(san)后(hou)(hou)按規(gui)定(ding)方(fang)法檢出色(se)(se)譜(pu)斑點。

2、上行法 色(se)(se)譜(pu)缸(gang)基本(ben)和下行法相(xiang)(xiang)似，唯除(chu)去溶劑槽和支架，并在色(se)(se)譜(pu)缸(gang)蓋上的(de)孔(kong)中加塞，塞中插(cha)入(ru)玻璃懸(xuan)(xuan)鉤(gou)，以(yi)便將(jiang)點(dian)樣后(hou)(hou)的(de)色(se)(se)譜(pu)濾(lv)(lv)紙(zhi)掛在鉤(gou)上。色(se)(se)譜(pu)濾(lv)(lv)紙(zhi)一(yi)般長約25cm，寬度則視需要(yao)而定。必要(yao)時可將(jiang)色(se)(se)譜(pu)濾(lv)(lv)紙(zhi)卷成筒(tong)形。點(dian)樣基線距底邊約2.5cm，點(dian)樣方(fang)法與(yu)下行法相(xiang)(xiang)同。色(se)(se)譜(pu)缸(gang)內加入(ru)適量流(liu)(liu)動相(xiang)(xiang)，放置，俟流(liu)(liu)動相(xiang)(xiang)蒸氣飽和后(hou)(hou)，再下降懸(xuan)(xuan)鉤(gou)，使色(se)(se)譜(pu)濾(lv)(lv)紙(zhi)浸入(ru)流(liu)(liu)動相(xiang)(xiang)約0.5cm，流(liu)(liu)動相(xiang)(xiang)即經毛細管作用沿(yan)色(se)(se)譜(pu)濾(lv)(lv)紙(zhi)上升，除(chu)另有(you)規定外，一(yi)般展開至15cm后(hou)(hou)，取出晾干，按規定方(fang)法檢視。

色譜(pu)可(ke)以(yi)向一個方向進(jin)行，即單向色譜(pu)；也可(ke)進(jin)行雙(shuang)向色譜(pu)，即先向一個方向展開，取出，俟流(liu)動(dong)相完全揮發(fa)后(hou)，將濾紙轉90°，再用原流(liu)動(dong)相或(huo)另(ling)一種流(liu)動(dong)相進(jin)行展。亦可(ke)多次(ci)展開，連續展或(huo)徑向色譜(pu)等。

薄層色譜法

按各單體所規定(ding)的(de)載體，放(fang)入(ru)適(shi)當容器，加(jia)入(ru)適(shi)量水以配成懸浮液，在厚度均勻一致的(de)50×200mm或200×200mm平滑玻(bo)璃板上將此懸浮液均布成0.25mm的(de)厚度，風干(gan)后一般在110度下干(gan)燥0.5-1h（或按單體規定(ding)）。

以離(li)(li)薄層板一(yi)端(duan)約25mm的(de)(de)位置作為點(dian)樣基線(xian)(xian)，用微(wei)量吸管按規定(ding)量吸取試樣液(ye)和(he)(he)對照（標(biao)準(zhun)）液(ye)，點(dian)于基線(xian)(xian)上(shang)，點(dian)與點(dian)之間(jian)的(de)(de)距離(li)(li)在10mm以上(shang)，液(ye)點(dian)的(de)(de)直徑約3mm，風(feng)干(gan)后(hou)，基線(xian)(xian)一(yi)端(duan)向下(xia)，將薄層板放(fang)入展開(kai)溶(rong)劑(ji)(ji)，溶(rong)劑(ji)(ji)層深(shen)10mm，并(bing)預經開(kai)展溶(rong)劑(ji)(ji)的(de)(de)蒸(zheng)汽飽和(he)(he)。在展開(kai)溶(rong)劑(ji)(ji)從基線(xian)(xian)上(shang)升至規定(ding)距離(li)(li)（一(yi)般(ban)為15cm）后(hou)，取出薄層板，風(feng)干(gan)，然后(hou)按規定(ding)的(de)(de)方法，對斑(ban)點(dian)的(de)(de)位置和(he)(he)顏色進行檢查(cha)。

氣相色譜法

氣(qi)相(xiang)色(se)譜法是在(zai)以適當(dang)的固(gu)定(ding)相(xiang)做(zuo)成的柱管內，利用(yong)氣(qi)體(ti)（載(zai)氣(qi)）作為移動相(xiang)，使(shi)試樣（氣(qi)體(ti)、液體(ti)或(huo)固(gu)體(ti)）在(zai)氣(qi)體(ti)狀態下(xia)展開(kai)，在(zai)色(se)譜柱內分離后(hou)，各(ge)種成分先后(hou)進入(ru)檢測(ce)器，用(yong)記錄儀記錄色(se)譜譜圖。 在(zai)對裝置進行調試后(hou)，按(an)各(ge)單體(ti)的規定(ding)條(tiao)件調整柱管、檢測(ce)器、溫(wen)度(du)和載(zai)氣(qi)流(liu)量(liang)。進樣口溫(wen)度(du)一般應(ying)(ying)高(gao)于柱溫(wen)30-50度(du)。如用(yong)火焰電離檢測(ce)器，其溫(wen)度(du)應(ying)(ying)等于或(huo)高(gao)于柱溫(wen)，但不得(de)低于100度(du)，以免水(shui)汽凝(ning)結。色(se)譜上(shang)分析成分的峰的位(wei)置，以滯留(liu)時間(jian)（從(cong)注(zhu)入(ru)試樣液到(dao)出現成分最高(gao)峰的時間(jian)）和滯留(liu)容量(liang)（滯留(liu)時間(jian)×載(zai)氣(qi)流(liu)量(liang)）來表示。這些(xie)在(zai)一定(ding)條(tiao)件下(xia)，就能反應(ying)(ying)出物質(zhi)所具有特殊值，并據此確定(ding)試樣成分。

根據色譜上出(chu)現的(de)(de)物(wu)質成分(fen)的(de)(de)峰(feng)(feng)(feng)面積或峰(feng)(feng)(feng)高進行定(ding)(ding)量。峰(feng)(feng)(feng)面積可(ke)用面積測(ce)定(ding)(ding)儀測(ce)定(ding)(ding)，按半(ban)寬度法(fa)求得(de)（即以(yi)峰(feng)(feng)(feng)1/2處(chu)的(de)(de)峰(feng)(feng)(feng)寬×峰(feng)(feng)(feng)高求得(de)）。峰(feng)(feng)(feng)高的(de)(de)測(ce)定(ding)(ding)方(fang)法(fa)是從峰(feng)(feng)(feng)高的(de)(de)頂點(dian)向(xiang)記錄紙橫座(zuo)標(biao)準垂線，找出(chu)此(ci)垂線與峰(feng)(feng)(feng)的(de)(de)兩下(xia)端(duan)聯結線的(de)(de)交(jiao)點(dian)，即以(yi)此(ci)交(jiao)點(dian)至峰(feng)(feng)(feng)頂點(dian)的(de)(de)距離長度為峰(feng)(feng)(feng)高。

定量方(fang)法(fa)可分以下三種：

1、內(nei)標(biao)(biao)(biao)準(zhun)法 取標(biao)(biao)(biao)準(zhun)被測成(cheng)分，按(an)依次增加或(huo)減少的已知(zhi)階段量(liang)(liang)(liang)，各自分別(bie)(bie)加入各單體所規定(ding)的定(ding)量(liang)(liang)(liang)內(nei)標(biao)(biao)(biao)準(zhun)物質中，調(diao)制(zhi)標(biao)(biao)(biao)準(zhun)溶(rong)液。分別(bie)(bie)取此(ci)標(biao)(biao)(biao)準(zhun)液的一定(ding)量(liang)(liang)(liang)注入色(se)譜柱，根據色(se)譜圖取標(biao)(biao)(biao)準(zhun)被測成(cheng)分的峰(feng)面(mian)積和(he)(he)峰(feng)高和(he)(he)內(nei)標(biao)(biao)(biao)物質的峰(feng)面(mian)積和(he)(he)峰(feng)高的比例(li)為(wei)縱座標(biao)(biao)(biao)，取標(biao)(biao)(biao)準(zhun)被測成(cheng)分量(liang)(liang)(liang)和(he)(he)內(nei)標(biao)(biao)(biao)物質量(liang)(liang)(liang)之比，或(huo)標(biao)(biao)(biao)準(zhun)被測成(cheng)分量(liang)(liang)(liang)為(wei)橫坐標(biao)(biao)(biao)，制(zhi)成(cheng)標(biao)(biao)(biao)準(zhun)曲(qu)線。

然(ran)后按(an)單體中所(suo)規定的(de)方法(fa)調(diao)制(zhi)(zhi)試樣(yang)液。在調(diao)制(zhi)(zhi)試樣(yang)液時，預先加入(ru)與(yu)調(diao)制(zhi)(zhi)標(biao)準液時等(deng)量的(de)內(nei)標(biao)物(wu)質(zhi)。然(ran)后按(an)制(zhi)(zhi)作(zuo)標(biao)準曲線時的(de)同樣(yang)條件(jian)下得出(chu)的(de)色譜，求(qiu)出(chu)被測成分的(de)峰面積或峰高(gao)和內(nei)標(biao)物(wu)質(zhi)的(de)峰積或峰高(gao)之比，再按(an)標(biao)準曲線求(qiu)出(chu)被測成分的(de)含量。

所用的(de)內標(biao)物質(zhi)，應采用其峰面積的(de)位(wei)置(zhi)與被測成(cheng)分的(de)峰的(de)位(wei)置(zhi)盡可(ke)能接近并與被測成(cheng)分以外(wai)的(de)峰位(wei)置(zhi)完全分離(li)的(de)穩定的(de)物質(zhi)。

2、絕對標(biao)準(zhun)曲(qu)(qu)線法(fa) 取標(biao)準(zhun)被(bei)測(ce)(ce)成(cheng)(cheng)分(fen)(fen)(fen) 按依(yi)次(ci)增加或(huo)減少階段法(fa)，各(ge)自(zi)調制(zhi)(zhi)成(cheng)(cheng)標(biao)準(zhun)液，注入一定量后，按色譜圖取標(biao)準(zhun)被(bei)測(ce)(ce)成(cheng)(cheng)分(fen)(fen)(fen)的(de)(de)(de)峰(feng)(feng)(feng)面(mian)(mian)積(ji)或(huo)峰(feng)(feng)(feng)高(gao)為縱(zong)座標(biao)，而以標(biao)準(zhun)被(bei)測(ce)(ce)成(cheng)(cheng)分(fen)(fen)(fen)的(de)(de)(de)含量為橫坐標(biao)，制(zhi)(zhi)成(cheng)(cheng)標(biao)準(zhun)曲(qu)(qu)線。然后按單體中(zhong)所規定的(de)(de)(de)方法(fa)制(zhi)(zhi)備(bei)試樣液。取試樣液按制(zhi)(zhi)標(biao)準(zhun)曲(qu)(qu)線時相同的(de)(de)(de)條件作出色譜，求出被(bei)測(ce)(ce)成(cheng)(cheng)分(fen)(fen)(fen)的(de)(de)(de)峰(feng)(feng)(feng)面(mian)(mian)積(ji)和(he)峰(feng)(feng)(feng)高(gao)，再按標(biao)準(zhun)曲(qu)(qu)線求出被(bei)測(ce)(ce)成(cheng)(cheng)分(fen)(fen)(fen)的(de)(de)(de)含量。 3、峰(feng)(feng)(feng)面(mian)(mian)積(ji)百分(fen)(fen)(fen)率法(fa) 以色譜中(zhong)所得各(ge)種成(cheng)(cheng)分(fen)(fen)(fen)的(de)(de)(de)峰(feng)(feng)(feng)面(mian)(mian)積(ji)的(de)(de)(de)總和(he)為100，按各(ge)成(cheng)(cheng)分(fen)(fen)(fen)的(de)(de)(de)峰(feng)(feng)(feng)面(mian)(mian)積(ji)總和(he)之比，求出各(ge)成(cheng)(cheng)分(fen)(fen)(fen)的(de)(de)(de)組(zu)成(cheng)(cheng)比率。

氣液色譜法

這時所(suo)指的(de)氣液色(se)譜法，主要用于(yu)各(ge)種香(xiang)料物質的(de)分析，基(ji)本條件(jian)和(he)參數主要依照美國精油協會（EOA）于(yu)1979年所(suo)建(jian)議的(de)方法。其基(ji)本原理(li)、操(cao)作、標準狀態等均與(yu)上述氣相色(se)譜法相同。

1、柱(zhu) 用304號合金所(suo)制(zhi)不銹鋼管，長(chang)3m，內(nei)徑2.16-2.57mm，外徑3.18mm。底物：極(ji)性(xing)柱(zhu)為聚乙二醇20M（Carbowax 20M）,分子量約2萬；非極(ji)性(xing)柱(zhu)為氣相(xiang)色譜級甲基(ji)硅(gui)氧烷(wan)（SE-30），或二甲基(ji)硅(gui)氧烷(wan)（OV-1或OV-101）。底物濃度(du)：重量的105。固體載體：10目(mu)或20目(mu)熔融煅燒(shao)過(guo)的硅(gui)藻土，經硅(gui)烷(wan)化(hua)和酸洗后(hou)，其自(zi)由(you)傾(qing)落(luo)密度(du)為0.2g/cm3，最小(xiao)120目(mu)，最大80目(mu)。裝填密度(du)每cm3應大于0.24g。

2、載氣(qi) 氦。最低流量為每分鐘25-50ml。

分析狀態
極性柱：起始溫度，最低75度；最終溫度，最高225度。升溫速度，每分鐘2-8度。
非極性柱：起始溫度，最低75度；最終溫度，不超過275度；升溫速度，每分鐘2-8度。
進樣(yang)溫度：225-250度。試(shi)樣(yang)量：0.1-1ul。

檢(jian)測器(qi)：用熱導池。檢(jian)測器(qi)的操作條(tiao)件(jian)應維持恒定。

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