水傳病原微生物PCR-納米金顯色快速檢測方法
摘要:水傳(chuan)病(bing)(bing)原(yuan)微生(sheng)(sheng)物是(shi)腹瀉(xie)等腸胃(wei)疾(ji)病(bing)(bing)發(fa)病(bing)(bing)的(de)(de)(de)(de)主要(yao)原(yuan)因(yin),而發(fa)展快速、有效的(de)(de)(de)(de)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)方(fang)法(fa)對于控制(zhi)和(he)(he)減(jian)少該類微生(sheng)(sheng)物的(de)(de)(de)(de)傳(chuan)播風險十分重(zhong)要(yao).因(yin)此,本(ben)文研究了PCR反(fan)(fan)應(ying)(ying)結(jie)合不修飾的(de)(de)(de)(de)納米金顆粒(Gold nano-particles, AuNPs)顯色(se)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)方(fang)法(fa)的(de)(de)(de)(de)最佳鹽濃度(du)、探(tan)針含量、PCR反(fan)(fan)應(ying)(ying)條件(jian)等,并從納米金制(zhi)備、病(bing)(bing)原(yuan)菌種類、檢(jian)(jian)測(ce)(ce)特異性等方(fang)面進行(xing)考(kao)核,確定了最優(you)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)條件(jian)為:10 μL PCR擴增(zeng)產物混(hun)合20 pmol探(tan)針,95 ℃反(fan)(fan)應(ying)(ying)5 min,55.5 ℃反(fan)(fan)應(ying)(ying)3 min后(hou),40 ℃雜交(jiao)10 min;此時,先后(hou)加(jia)入90 μL實驗(yan)用納米金和(he)(he)一(yi)定濃度(du)的(de)(de)(de)(de)PBS溶(rong)液,室溫觀察顏色(se)變(bian)化.結(jie)果(guo)發(fa)現,納米金溶(rong)液由紅色(se)變(bian)為紫色(se)或(huo)近于無色(se)為陽性結(jie)果(guo),對應(ying)(ying)的(de)(de)(de)(de)吸光度(du)值遷移出530 nm,以此可(ke)達到快速檢(jian)(jian)測(ce)(ce)病(bing)(bing)原(yuan)微生(sheng)(sheng)物的(de)(de)(de)(de)目的(de)(de)(de)(de).

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